在細胞培養工作中,常需要了解細胞生活狀態(tài)和鑒別細胞死活,確定細胞接種濃度和數量以及了解細胞存活率和增殖度,如用酶消化制備的細胞懸液中細胞活力的鑒別,凍存細胞復蘇后的活力檢測等。細胞懸液制備后,常用活體染料臺盼藍對細胞進(jìn)行染色,進(jìn)行細胞計數。準確的細胞計數對評估培養的細胞生長(cháng)是至關(guān)重要,因為錯誤的計數會(huì )導致關(guān)于細胞健康的錯誤結論。細胞計數可以使用血球計數板、自動(dòng)計數器進(jìn)行。細胞計數一般用血細胞計數板,按白細胞計數方法進(jìn)行計數,便于確定細胞的生活狀況。
細胞生長(cháng)的每個(gè)階段:
停滯期:細胞適應培養條件的階段,細胞在此階段不分裂。細胞通常在起始培養后的24小時(shí)內附著(zhù),該階段的總時(shí)長(cháng)取決于培養之初使用細胞的生長(cháng)階段和接種密度。
對數期:細胞在此階段積極分裂,是評估群體生長(cháng)和通用數據收集的時(shí)間。對數期的后期,過(guò)度擁擠導致細胞脅迫之前是傳代細胞(亞培養)的時(shí)機。
平穩期:隨著(zhù)細胞達到100%融合,細胞在此階段生長(cháng)放緩,不足1/10的細胞處于活躍細胞周期。細胞在此階段容易受傷,因此需要小心觀(guān)察以確保細胞在此階段之前或之初進(jìn)行傳代。
衰退期:細胞周期的自然組成部分。在此階段,隨著(zhù)細胞死亡占據主導地位,活細胞群體數量減少。
細胞計數原理:細胞懸液制備后,需要計算懸液中所含細胞數量;一般以細胞數/毫升表示。因只有健康的細胞才有活力,接種后能夠生長(cháng)增殖,所以在接種應先檢查一下細胞的活力。