細胞計數的方法和原理主要是哪些呢?
發(fā)布日期:2022-01-11 瀏覽次數:1105
細胞計數是細胞實(shí)驗中非常重要的一個(gè)環(huán)節,科研工作者需要從多方面對培養的細胞進(jìn)行分析,比如活細胞數、死細胞數、細胞存活率等。經(jīng)典的通過(guò)臺盼藍染色方法對細胞進(jìn)行人工計數,是我們研究細胞常備技能之一。隨著(zhù)科技發(fā)展,自動(dòng)化的細胞計數儀應運而生,它以便捷、快速等優(yōu)勢被廣泛應用到細胞實(shí)驗中。
細胞計數的方法和原理主要是哪些呢?
1.手工顯微鏡法
又稱(chēng)血球計數板法,是原始的細胞計數方法,顯微鏡下調整不同放大倍數的物鏡,通過(guò)染色的方法人工觀(guān)察細胞狀態(tài)判斷細胞死活,進(jìn)行計數。通過(guò)檢測出一定體積的均勻細胞懸液中的細胞個(gè)數(對一定數量的小格或中格計數,根據相應的小/中格所占的體積,可以推算出單位體積的溶液中微生物細胞的密度或總數),換算出每毫升的細胞個(gè)數,從而得到細胞懸液的細胞濃度。實(shí)驗過(guò)程中采用五點(diǎn)取樣法,即一般隨計數室四角上的四個(gè)中方格以及正中間的一個(gè)中方格進(jìn)行統計(對于壓線(xiàn)的,采取數上不數下,數左不數右的原則)。這種方法數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時(shí),按照1個(gè)細胞計算。
2.庫爾特原理又稱(chēng)電阻抗檢測原理。細胞是相對不良導體,當細胞懸浮電解質(zhì)中,將小孔管插入細胞懸液,使其管內充滿(mǎn)稀釋液,位于小孔管兩側電極產(chǎn)生穩定電流。當一個(gè)細胞通過(guò)小孔時(shí),瞬間引起電壓變化出現一個(gè)脈沖信號,細胞體積越大,引起脈沖越大,產(chǎn)生脈沖振幅越高,脈沖信號由下列步驟完成:①放大;②閾值調節;③甄別;④計數。采用這種計數原理的儀器具代表性的是CASY細胞計數儀,這種原理的儀器內置液路系統,需要定期清洗管路防止堵塞。