基因檢測試劑盒是根據SRY基因組的特點(diǎn)設計生物素標記的引物,PCR擴增SRY基因目的片段。將SRY基因特異性寡核苷酸探針固定在尼龍膜上。根據生物素-親和素系統(biotin-avidin system,BAS)原理,將PCR擴增產(chǎn)物與固化在膜條上的探針雜交,洗膜后加入辣根過(guò)氧化合物酶標記的親和素(POD),與PCR產(chǎn)物上的生物素結合。加入顯色液(TMB,H2O2),辣根過(guò)氧化物酶催化其底物H2O2分解,TMB作為供氫體參與反應后產(chǎn)生藍色的斑點(diǎn)。根據雜交信號斑點(diǎn)的有無(wú)來(lái)判斷樣本中是否存在SRY基因。本試劑盒能有效檢測血漿中微量SRY基因。
基因檢測試劑盒使用注意事項:
1、測定中需使用的所有試劑和96孔板提前30min放置室溫溫育(否則會(huì )影響試驗準確性),注意12連管必須溫育后再從平板上取下,未使用完的預包被板條應置于有干燥劑的封口袋中密封保存;加樣時(shí),要注意各成分加入量的準確。例如,對于加入體積較大的成分來(lái)說(shuō)應保證移液器的準確,而對于加樣量較小的成分,除保證移液器的準確外,還應注意盡量將液體加入已有液體的液面之下,確保成分加入。操作應嚴格按照說(shuō)明書(shū)要求及步驟進(jìn)行,每批實(shí)驗應保證與陰性對照和陽(yáng)性對照同時(shí)進(jìn)行檢測與分析,以確保檢測環(huán)境與檢測試劑性能的合格。
2、加樣完畢后,依據試劑盒對應耗材選擇正確且匹配的熒光PCR儀進(jìn)行擴增反應及熒光收集。試劑使用前應充分搖勻;
3、搖動(dòng)平板混勻時(shí)注意避免樣品之間交叉污染;
4、使用洗滌液漂洗時(shí),洗滌液需要填滿(mǎn)每個(gè)小孔,進(jìn)行充分漂洗;
5、研磨好的樣品如果不能一次全部測量,可以暫時(shí)在4℃避光保存,但是建議在24h內測定;
6、結果判讀應以陽(yáng)性對照作為標準,嚴格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,結果判讀請在反應終止后15min內完成。