細胞計數又稱(chēng)血球計數板法,是細胞計數方法,顯微鏡下調整不同放大倍數的物鏡,通過(guò)染色的方法人工觀(guān)察細胞狀態(tài)判斷細胞死活,進(jìn)行計數。通過(guò)檢測出一定體積的均勻細胞懸液中的細胞個(gè)數(對一定數量的小格或中格計數,根據相應的小/中格所占的體積,可以推算出單位體積的溶液中微生物細胞的密度或總數),換算出每毫升的細胞個(gè)數,從而得到細胞懸液的細胞濃度。實(shí)驗過(guò)程中采用五點(diǎn)取樣法,即一般隨計數室四角上的四個(gè)中方格以及正中間的一個(gè)中方格進(jìn)行統計(對于壓線(xiàn)的,采取數上不數下,數左不數右的原則)。這種方法數細胞的原則是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時(shí),按照1個(gè)細胞計算。
細胞計數要點(diǎn):
?、龠M(jìn)行細胞計數時(shí),要求懸液中細胞數目不低于1×107 L-1,如果細胞數目很少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養液中。
?、谝蠹毎麘乙褐械募毎稚⒘己?,否則影響計數準確性。
?、廴佑嫈登?,應充分混勻細胞懸液,尤其時(shí)多次取樣計數時(shí)更要注意每次取樣都要混勻,以求計數準確。
?、軘导毎脑瓌t是只數完整的細胞,若細胞聚集成團時(shí),只按照1個(gè)細胞計算。如果細胞壓在格線(xiàn)上時(shí),則只計上線(xiàn),不計下線(xiàn),只計右線(xiàn),不計左線(xiàn)。
?、莶僮鲿r(shí),注意蓋片下不能有氣泡,也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑?,否則要重新計數。
初學(xué)者易犯的錯誤:計數前未將待測懸液吹打均勻。滴入細胞懸液時(shí)蓋玻片下出現氣泡。滴入懸液時(shí)的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。
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